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聚合酶鏈(PCR)反應(yīng)無擴(kuò)增條帶原因分析

來源：上海撫生實(shí)業(yè)有限公司 >> 進(jìn)入該公司展臺(tái) 2022/06/17 11:37:52 已瀏覽：次

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聚合酶鏈(PCR)反應(yīng)無擴(kuò)增條帶原因：

1、酶失活或在反應(yīng)體系中未加入酶。Taq DNA聚合酶因保存或運(yùn)輸不當(dāng)而失活，往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結(jié)果。

2、模板含有雜質(zhì)。特別是對(duì)甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸，造成DNA脫嘌呤而影響PCR的結(jié)果。

3、變性溫度是否準(zhǔn)確：PCR儀指示溫度與實(shí)際溫度是否相符，過高酶在前幾個(gè)循環(huán)就迅速失活；過低則模板變性不。

4、反應(yīng)系統(tǒng)中污染了蛋白酶及核酸酶，應(yīng)在未加Taq酶以前，將反應(yīng)體系95℃加熱5-10 min。

5、引物變質(zhì)失效。人工合成的引物是否正確。是否純化，或因儲(chǔ)存條件不當(dāng)而失活。

6、引物錯(cuò)誤。利用BLAST檢查引物特異性或重新設(shè)計(jì)引物。

7、 DNA凝膠電泳時(shí)加入陽(yáng)性對(duì)照，確保不是DNA凝膠和PCR程序的問題。

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